中美现行药典无菌检查法方法差异

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USP-NF2021

通则 < 71 > 

2020年版《中国药典（四部）》

通则1101

差异描述

1

如需储存培养基，应置无菌密闭容器中，在2～25 ℃环境下保存

制备好的培养基若不即时使用，应置无菌密闭容器中，在2～25℃、避光环境下保存

《中国药典》培养基储存条件多了“避光”要求

2

“硫乙醇酸盐流体培养基”配制方法：将L -胱氨酸、琼脂、氯化钠、葡萄糖、酵母提取物和酪蛋白胰酶消化物与纯化水混合，加热至溶解。将硫乙醇酸钠或硫乙醇酸溶解于上述溶

液，如必要，加入1N氢氧化钠调灭菌后溶液pH为7.1±0.2，如需过滤，可再次加热但不煮沸，趁热用润湿的滤纸过滤。加入刃天青钠溶液，混合，分装至适宜容器

“硫乙醇酸盐流体培养基”的配制方法：取除葡萄糖和刃天青溶液外的各成分混合，微温溶解，调pH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调灭菌后25℃的pH为7.1±0.2。分装至适宜容器

二者的配制方法在各成分的添加顺序、调pH的具体试剂及具体加热时间等方面略有不同

2

硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃培养

除另有规定外，硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃培养。接种生物制品的硫乙醇酸盐流体培养基的容器应分成2等份，1份置30～35℃培养，1份置20～25℃培养

鉴于我国生物制品无菌检查曾发现过个别品种在20～25℃培养的硫乙醇酸盐流体培养基中有菌生长的情况。《中国药典》本着求同存异的整合原则，保留了生物制品该培养基分别置2个温度范围培养的规定

3

必要时，可使用“硫乙醇酸盐替代培养基”代替“硫乙醇酸盐流体培养基”

无

《中国药典》无“硫乙醇酸盐替代培养基”

3

对于无法采用薄膜过滤法检测的含防腐剂汞的供试品，如已按照需氧菌、厌氧菌和真菌促生长试验所述方法进行了验证，可使用硫乙醇酸盐流体培养基代替大豆酪蛋白消化物

培养基在20～25℃进行培养

无

《中国药典》无该说明

4

“大豆酪蛋白消化物培养基”

“胰酪大豆胨液体培养基”（TSBTrypticSoyaBroth）

虽名称不同，但配方一致

4

“大豆酪蛋白消化物培养基”的配制方法：将配方中固体溶于纯化水中，微温溶解。将溶液冷却至室温，并用1N氢氧化钠调灭菌后的pH为7.3±0.2

“胰酪大豆胨液体培养基”的配制方法：取除葡萄糖外各成分，

混合，微温溶解，滤过，调灭菌后25℃的pH为7.3±0.2，加

入葡萄糖，分装，灭菌

二者配制方法略有不同，如各成分的添加顺序及调节pH的具体试剂等

5

青霉素或头孢菌素用培养基

《中国药典》将具有抑菌性供试品所需培养基统一概述在“中和或灭活用培养基”

名称不同

6

促生长试验中，接种少量（不大于100cfu）的生孢梭菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌至适量硫乙醇酸盐流体培养基，每株菌均使用单独的培养基。接种少量（不大于100 cfu）生孢梭菌至适量硫乙醇酸盐培养基替代品。接种少量（不大于100cfu）的黑曲霉、枯草芽孢杆菌和白色念珠菌至适量大豆酪蛋白消化物培养基，每株菌均使用单独的培养基

灵敏度检查，取适宜装量的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种不大于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照；取适宜装量的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种不大于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照

促生长试验中，《美国药典》包含了“硫乙醇酸盐替代培养基”；

《中国药典》则要求每种菌同时接种2支培养基，并另取1支作为空白对照

6

取部分培养基，培养14d，应无菌生长

每批培养基一般随机取不少于5支（瓶），置各培养基规定的

温度培养14d，应无菌生长

无菌性检查中，《中国药典》对于具体取样数有明确规定

6

促生长试验

灵敏度检查

名称不同，但试验目的相同，均为检查培养基的灵敏度

7

菌株来自ATCC

菌株来自CMCC

国别不同，菌株来源不同

8

稀释液和冲洗液有：1）液体A；2）用于青霉素类或头孢菌素类的液体A；3）液体D；4）液体K

稀释液和冲洗液有：1）0.1%无菌蛋白胨水溶液；2）pH7.0无菌氯化钠- 蛋白胨缓冲液；3）其他经验证的适宜溶液（如0.9%无菌氯化钠溶液）。如需要，可在上述液体中加入表面活性剂或中和剂等

除液体A即为0.1%无菌蛋白胨水溶液外，两国药典其他稀释液和冲洗液均不同

9

方法适用性试验用菌同促生长试验

方法适用性试验用菌将大肠埃希菌替代铜绿假单胞菌作为

试验用菌

《中国药典》中发现，铜绿假单胞菌对一些抗革兰阴性杆菌为主的抗生素不敏感，故选择更敏感的大肠埃希菌更符合方法适用性试验的目的

10

供试品检验需包括阴性对照试验

供试品检验需同时进行阳性对照试验和阴性对照试验

《中国药典》无菌检查法一贯强调应同时进行供试品的阳性对照试验

11

如供试品具有抑菌性，需用冲洗液冲洗滤膜不少于3次，冲洗液种类及用量同方法适用性试验。每张滤膜均不得冲洗超过5次，每次100mL，即使方法适用性试验表明该冲洗方法

不能完全清除供试品抑菌性，也不必增加冲洗次数

如供试品具有抑菌作用，须用冲洗液冲洗滤膜，冲洗次数一般不少于3次。每张滤膜每次冲洗量一般为100mL，总冲洗量一般不超过500mL，最高不得超过1000mL，以避免滤膜上

的微生物受损

《中国药典》中要求应尽可能通过冲洗消除抑菌活性，对于超过1000mL/膜仍不能完全消除抑菌作用的供试品，会采用中和、分膜等操作进一步消除

12

无菌气雾剂产品

无菌气雾剂供试品

《中国药典》更详细地描述了气雾剂供试品取样操作的具体方式和步骤

13

供试品接入量应不超过培养基体积的10%

供试品接入量应不超过培养基体积的10%。硫乙醇酸盐流体

培养基装量应不低于15mL，胰酪大豆胨液体培养基装量应不低于10 mL。一般样品2种培养基接种的瓶或支数相等。

生物制品接种硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基的瓶数或支数为2∶1

《中国药典》的要求可防止一些用太少的接种量和太少的培养基用量的操作，保证微生物有足够的营养生长以及对试验结果进行观察和判断

14

如果供试品使培养基浑浊，导致目视检查不能确定是否存在微生物生长，则在培养开始14 d后，将部分培养基（每份不少于1mL）转种至同种新鲜培养基中，将原始培养物和新接种的培养基继续培养不少于4d

如在加入供试品后或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14d后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液不少于1mL转种至同种新鲜培养基中，将原始培养物和新接种的培养基继续培养不少于4 d；或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌

确认培养结果时，对于目视检查不能确定是否存在微生物生长的情况，《美国药典》仅提及了转种的方式，《中国药典》提及也可涂片检测是否有菌