布鲁氏菌竞争ELISA抗体检测试剂盒使用操作说明书

【作用与用途】

布鲁氏菌竞争ELISA抗体检测试剂盒（Brucellosis Antibody Test Kit）用于检测牛、羊血清中的布鲁氏菌特异性抗体，用于血清学诊断。 

【检测原理】

布鲁氏菌竞争ELISA抗体检测试剂盒采用竞争ELISA方法，在酶标板微孔上预包被布鲁氏菌抗原。在实验中，加入稀释后的待检血清、酶标二抗工作液、单克隆抗体工作液经过温育后，若样品中含有布鲁氏菌抗体，则与单克隆抗体竞争板孔中包被的抗原表位，酶标二抗与单克隆抗体结合，形成布鲁氏菌抗原-单克隆抗体-酶标二抗复合物，温育后将多余的游离抗体通过洗涤去除，在微孔中加入TMB显色液，经酶催化产生的蓝色信号与样品中的抗体含量成反比，加入终止液终止反应后，用酶标仪450 nm波长测定反应孔中的吸光度OD值。

【主要成分与含量】

【需自备的材料】 

微量移液器、量筒、酶标仪（450 nm）、去离子水、离心机（4000 rpm）、恒温培养箱（37 ℃）、计时器等。

【用法与判定】

1、用法

1.1 试剂配制

洗涤工作液：使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（20～25 ℃），并摇动，使沉淀溶解（最好在37 ℃恒温培养箱中加热5～10 min），然后用蒸馏水作10倍稀释（例如：75 mL的浓缩洗涤液加上675 mL蒸馏水）混匀，稀释好的洗涤液2～8℃可存放7日。

1.2 样本处理

取动物全血，待血液凝固后，4000 rpm离心10 min，收集上清。也可以自然凝固析出血清，无溶血。

1.3 待检血清和对照血清的稀释

在血清稀释板中按1:40稀释待检血清、阴性对照血清和阳性对照血清（如195 µL样品稀释液中加5 µL血清样品），充分混匀。

1.4 操作步骤

① 取包被板（根据样品多少，可拆开分次使用），将稀释好的待检血清、阳性对照血清和阴性对照血清分别加入到板孔中，50 μL/孔，其中阳性对照血清和阴性对照血清各加 2 孔。加样结束后，再依次加入酶标二抗工作液50 μL/孔，抗体工作液100 μL/孔。轻轻振匀孔中液体，盖上盖板膜，37 ℃温箱中避光反应30 min。

② 弃去孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液300 µL，静置1 min后，弃去洗涤液。洗涤4次后在吸水纸上拍干。

③ 将底物A液与底物B液按1:1混合，加入孔中，100 µL/孔，盖上盖板膜，37 ℃温箱中避光反应15 min。

④ 每孔加入终止液50 µL，5 min内测定结果。

2、判定

在酶标仪上读各孔OD450nm值。

①试验成立的条件：

阳性对照孔OD均值应＜0.2，阴性对照孔OD均值应＞1.0，试验结果才有效；否则，应进行重复试验。

② 计算方法：

PI（阻断率）=100 % -（样品OD值÷阴性OD均值）×100%

③ 阴阳性判断：

PI≥30 %判为阳性，PI＜30%判为阴性。

【注意事项】

1、布鲁氏菌竞争ELISA抗体检测试剂盒使用前各试剂应平衡至室温。使用后放回2~8 ℃保存。

2、不同批号的试剂盒组份不得混用，不同试剂使用时应防止交叉污染。

3、底物液和终止液不能暴露于强光或接触氧化剂。

4、待检血清数量较多时，应先稀释完所有待检血清，再加到抗原包被板上，使反应时间一致。

5、稀释10×浓缩洗涤液时，如发现有结晶，应加热使其溶解后再使用。

6、移液时，应尽量准确，防止产生气泡。

7、应严格遵守各操作步骤规定的时间和温度。

【贮藏与有效期】2～8℃避光保存，有效期为12个月。

【规格】96孔/盒；192孔/盒

【生产企业】  北京中海生物科技有限公司

              中海生物技术（枣庄）有限公司  

              网址：www.zhzbio.com  

仅供兽医诊断使用

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