大肠杆菌O抗原定型血清说明书（固体）-中海生物

系用大肠杆菌菌株灭活抗原接种健康兔，采血，分离血清，标化，经冷冻干燥制成冻干血清。

【性状】本品为白色、淡黄色或淡红色疏松团块。

【作用与用途】用于大肠杆菌O抗原血清型鉴定。

【用法与判定】

1．血清的稀释

多价血清的配制：将多种大肠杆菌O抗原定型血清分别用0.5％石炭酸生理盐水恢复原量（1mL）后混合，装入青瓶，盖紧。

单因子血清的配制：将一种大肠杆菌O抗原定型血清溶解于5mL 0.5％石炭酸生理盐水（视为1：5稀释），装入小瓶，盖紧。

2．抗原的制备

平板凝集抗原制备：将被检菌株划线接种于麦康凯琼脂平板，置37℃培养24小时。在麦康凯琼脂平板上挑选光滑圆整菌落，接种普通琼脂斜面，37℃培养24小时。用1.5～2.0mL石炭酸生理盐水将普通琼脂斜面培养物全部洗下，收集于一小试管中，于121℃高压2小时，破坏其“K”抗原。

试管凝集抗原制备：将被检菌株划线接种于麦康凯琼脂平板，置37℃培养24小时。在麦康凯琼脂平板上挑选光滑圆整菌落，接种普通琼脂斜面，37℃培养24小时。取普通琼脂斜面培养物接种普通肉汤培养基(100mL)，置37℃振荡培养8～15小时。培养物于121℃高压2小时，破坏其“K”抗原。

3．平板凝集反应

抗原先与大肠杆菌O抗原多价定型血清进行平板凝集反应，然后再与大肠杆菌O抗原定型血清进行平板凝集反应。即抗原和血清各取50uL于玻璃板上混匀，涂成直径约2cm的圆膜，1分钟中内出现明显凝集颗粒判定为“阳性”。同时以抗原与0.5％石炭酸生理盐水混合物作对照，观察有无自凝集现象。

4．试管凝集反应  

在1排小圆底试管中先加稀释液0.5%石炭酸生理盐水，第1管加1.5mL，从第2管起各管加0.5mL，然后在第1管加入大肠杆菌O抗原定型血清(1:5)0.5mL，混匀后，从第1管吸取0.5mL，加入到第2管,依次作1:20、1:40、1:80、1:160、1:320……1:10240系列稀释，然后各管加抗原0.5mL，振荡使血清和抗原充分混匀，放入37℃温箱18～20小时，取出后在室温静置2小时，记录每管的反应情况。如凝集价高于或等于1：640（第5管）即可判定为“阳性”。每个试验均应设有被检抗原+0.5%石炭酸生理盐水对照。

  结果判定：

   “#”  ——液体完全透明，管底覆盖明显的伞状凝集沉淀物。

   “+++”——液体略呈混浊，管底伞状凝集沉淀物明显。

   “++” ——液体呈中等程度混浊，管底有中等量伞状凝集沉淀物。

   “+”  ——液体不透明或透明度不明显，有不显著的伞状凝集沉淀物。

 “-”  ——液体混浊，无任何凝集沉淀物，细菌可能沉于管底，呈光滑圆盘状，振荡时呈均匀混浊。

最终结果判定：以“++”作为被检抗原的效价终点。

 【规格】1ml/支

【贮藏与有效期】溶解后的血清在2～8℃保存，有效期为12个月。

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