ELISA酶联免疫吸附测定步骤和注意事项要点

通常情况下，各种类型的ELISA酶联免疫吸附测定方法需用（固相包被→添加待测样品→温育→清洗→添加酶标物→温育→清洗→添加底物→温育→加终止液→比色→判定结论)这些操作顺序步骤。中海生物酶联免疫吸附试验操作流程较为复杂，操作流程不恰当会产生很大的偏差。操作流程中应特别注意这些五个注意事项要点。

要点⑴伴随着疾病进展或受别的方面影响，体内某种抗体的含量变化很大，需用对样品做好预备处理，如适度稀释血清样品或离心血脂。在间接法中，适度稀释样品也能够降低非特异性反应。

要点⑵液体进料器通常用以添加样品。在中海ELISA酶联免疫测定中，海加样有四次（加样品/加酶结合物/加底物/加终止液）。添加样品时，需要为每个样品使用一个移液管喷嘴，以防止交叉污染。添加酶结合物及底物和终止液时不用替换吸嘴。

要点⑶在成批人工检验检测时，还应特别注意操作流程时间误差的影响。中'海样品添加时长和混合时长的不同，促使抗原抗体反应和酶促反应的时长不一致，对竞争法和定量检测有很大影响。无意间的特别注意将会造成不正确的结论或不精准的量化分析。

要点⑷洗涤是影响酶联免疫吸附中海ELISA试验成功与失败的重要环节。最终目的是除去未融合的免疫反应物，停止抗原-抗体反应，并除去与反应无关的样品。反应过程中吸附在固体载体上的成分/游离酶标记和非特异性物质。洗板机可用以洗板或手工洗板。前面一种清洗品质高，各反应孔清洗结论匀称，批次间差异性小。手工洗版要特别注意操控每个孔的洗版效果，差异性不适合过大。

要点⑸为了更好地精准测定方法结论，中 海应使用酶联免疫吸附试验读数器和微孔板读数器。酶标仪可重复性能好。比色判读可以选择单波长和双波长。应按照其反应液的不同颜色选择不同的波长滤光片，反应孔的吸光度值应通过空白孔的零点校准来确定好。

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