商品化脱水合成培养基制备使用注意事项

㈠培养基标准规定

培养基的规范制备是微生物检验中最基础流程其一。当采用脱水培养基和别的成份时，尤其是哪些包含毒性成分如胆盐或别的选择剂的成份，应遵循制造厂商给予的优秀实验室明文规定和情况说明。中.海培养基制备不合理会造成培养基产生品质问题，如含琼脂培养基不凝固、酸碱值没有在标准规定范围内、灭菌后颜色变深等。

当采用中海脱水合成培养基制备培养基时，应严格遵守制造厂商给予的情况说明做好制备。如净重和体型\酸碱值值\制备时间\灭菌标准规定和操作流程步骤等。实验室采用各种基本成分制备培养基时，应准确无误依照配料配方做好制备，并记载相关信息及资料，如：培养基的命名和类型\试剂级别\各成份的成分含量/制造厂商/批号/酸碱值值/培养基的体型/无菌措施包括实施方法/温度和时间/配置时间/人员等，用于追溯。

㈡培养基用水

实验用水的电导率在二十五度时不可高于二十五μS/cm，等同于电阻率≥0.4μω/c㎡，除了另有明文规定。水的微生物污染不可高于103CFU。依据GB4789.2菌落总数，应采用平板计数琼脂培养基，在三十六度(±1)培养四十八小时(±2)做好按时微生物污染查验。

㈢称重融解培养基

准确无误称重所需求量的脱水合成培养基。必需时戴上口罩或在通风柜中实际操作，以预防吸进包含有毒物质的培养基粉末。先添加适量的水，完全混合，防止中'海培养基结块，随后兑水至所需求量，适度进行加热，频繁或持续拌和，使其快速分散化。如有需要，应完全彻底融解。含琼脂的培养基应当在进行加热前泡浸数分钟。

㈣培养基酸碱值测定调控

用酸碱值计测定酸碱值，必需时在灭菌前做好调控。除了另有明文规定，灭菌后培养基降温至二十五度时，酸碱值应在标准规定酸碱值0.2范围之内。通常采用浓度为40 g/L（约1摩尔每升）的氢氧化钠溶液或浓度为约36.5 g/L（约1摩尔每升）的盐酸溶液来调控培养基的酸碱值。假如灭菌后需要调节，请采用灭菌或灭菌溶液。

㈤分开包装培养基

将准备好的培养基分开包装到适度的器皿中，器皿的体型应起码比培养基大二十倍。

㈥培养基灭菌消毒

应利用湿热或过滤灭菌对培养基做好灭菌消毒。有很多培养基无法或不用高压灭菌，可以采用煮沸灭菌。例如某些培养基如SC肉汤中包含对光和热敏感的成分，煮沸后应快速降温，遮光储存。有很多实验试剂可以不经过灭菌就直接采用。

高压灭菌器或中海培养基配制设施中的高温灭菌

通常选用一百二十一度±3高压灭菌十五分钟，具体中 海培养基按食品微生物检验标准的规范做好灭菌。培养基的体积不可高于一千毫升，不然将会影响灭菌时过热。所有的培养基实际操作应依照规范或使用方法做好。灭菌实际效果的操控是重要环节。加热后，以适度的方式冷却，以防止过热。这针对大容量的敏感培养基极其关键，比如包含亮绿的培养基。

过滤器灭菌可以在真空或压力下做好。使用孔径为0.2微米的无菌设施和滤膜。对设施的所有的部份做好消毒或使用事先消毒的设施。有些过滤膜上附着有蛋白质或其他物质，如抗生素。以便实现有效的过滤，过滤膜应当事先用无菌水润湿。

查验经湿热灭菌或过滤灭菌的培养基，尤其是酸碱值/颜色/灭菌实际效果和均匀度。

㈦培养基的使用

⑴琼脂培养基溶解

将琼脂培养基倒入沸水浴中或利用具备相同实际效果的方式方法溶解，如高压灭菌器中的层流蒸汽。高压琼脂培养基应尽可能减少再加热时长，防止溶解后过热。溶解后应在常温下短期置放两分钟，防止玻璃容器碎裂。

将溶解的培养基倒入四十七至五十度。恒温水浴冷却保温，可依据培养基真实凝固温度适度提高水浴温度，一直到使用。培养基达到四十七度至五十度的时长与培养基的品种及体积和数量相关。溶解的培养基要尽早使用，静放时长不可以高于四钟头。未使用的培养基不可再度固化用以以后使用。敏感培养基要特别重视，溶解后的保温时长要尽可能降低。若有特别要求，请参考特定规范。倒入试样的琼脂培养基温度应操控在四十五度上下。

⑵培养基除氧

需要时，将培养基倒入沸水浴或蒸气浴中加热十五分钟后使用；加热时松掉器皿的外盖；加热后盖紧，快速冷却至使用温度如FT培养基。

⑶添加添加剂成分

当培养基冷却至四十七~五十度时，应添加热不稳定添加剂。无菌添加剂在添加前要置放在常温下，以防止冷液体影响琼脂凝结或形成薄片。将培养基与添加的成分缓慢充分混合，并尽早分开包装到预备器皿中。

⑷平板配制和保存

将溶解的培养基倒入皿中，在皿中形成厚度至少为三毫米、直径为九十毫米的皿，通常添加十八毫升至二十毫升琼脂培养基。平板扣上板盖后，放置在水平面上冷却凝固琼脂。要是平板需要储存或培养

要是时长高于四十八小時或培养温度高于四十度，则需要倒更多的培养基。凝固后的培养基应该及时采用或贮藏于避光处及5度±3冰箱密封袋中，避免中海生物培养基成份产生变化。在平板的底端或侧边做标识，主要包括名称、制备日期和有效期。合适的培养基编码系统也可用作标识。

将倒入的平板放入密封袋中冷藏，可以延长储存期。为了避免冷凝水的产生，平板在放入袋中之前应该冷却。储存前不能干燥培养基表面。针对表面接种培养的固体培养基，应先将琼脂表面干燥：揭开平板盖，在25度~50度的烘箱或培养箱中倒置平板；或者放在有对流的无菌净化站，直到培养基表面的水滴没有了。当心不能太过干燥。应依据制造商给予的说明采用商用平板琼脂培养基。

㈧废弃培养基

所有的被污染和未采用的培养基都要以安全可靠的方式并依据最新法律法规对其进行正确处理。

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