计算微生物生长数量测定方法总结

中海生物技术枣庄公司总结计算微生物数量zhzbio.com微生物数量测定使用的十三种方法。

方法一：血球计数：

血球计数是具有特殊的结构尺度和厚度玻璃片。玻璃上有四个凹槽和两个脊，中间有一个短横凹槽和两个平台，两个脊的表面比两个平台的表面高0.1毫米。每个平台都刻有不同规格的格子，在中心0.1平方毫米的面积上刻有400个小方块。用油镜观察，统计某个大格子内微生物的数量，可以计算出1ml菌液的含量，血球计数方法简单、直观、快捷，但只适用于对产生的孢子进行计数由单细胞微生物或丝状微生物组成，结果是包括死细胞在内的细菌总数。

方法二：染色计数：

为了弥补有些微生物在油镜下不易查看计数，直接用血球计数法无法区分死细胞和活细胞的缺点，进而发明了染色计数法。在不同染料的帮助下，细菌可以被正确染色。中海认为这样在显微镜下活菌计数更为方便。

方法三：比例计数：

将霉菌孢子或红细胞等已知颗粒浓度的液体和待测细胞浓度的菌液按适量比例融合，靠显微镜观察并计算相应菌数，以获得未知菌液的细胞浓度。中海生物此法使用比较广泛，需要以已知颗粒浓度配制悬浮液为标准。

方法四：液体稀释：

对未知细菌样品进行连续10倍稀释。根据估计的数量，从最合适的三个连续10倍稀释液中，每个样品取5ml，接种1ml至3组含有培养液的十五个试管中。培养后记录每个稀释度已经生长的试管数，然后查看最大概率表MPN得到细菌样本的细菌数，并根据样本稀释度计算活菌含量多少？液体稀释计数方法常用于食品中微生物限度检测。

方法五：平板菌落计数：

这是最常用的活菌计数方法。将待测菌液进行梯度稀释，取适当数量的稀释菌液与相匹配的固体培养基混合均匀后凝固，在凝固后的固体培养基板上涂上菌液。保温培养后，将平板上出现的菌落数乘以菌液的稀释度，计算出原菌液中的菌数。通常在九厘米直径的平板上有50~500个菌落比较合适，平板菌落计数方法较为繁琐，要求操作者技术非常熟练。平板菌落计数法不仅能获得菌液中的活菌数，还可以将菌液中的细菌分离再培养一次获得单克隆。

方法六：试剂纸计数：

在平板计数法的基础上，开发了可以快速计数的小厚滤纸片、琼脂片等小商品。在滤纸和琼脂片中吸出合适的培养基，加入活性指示剂2,3,5-三苯基氯化四唑TTC，将待测菌液浸入无色培养后放入密封包装袋中。短期培养后，滤纸上出现一定密度的玫瑰色微菌落，与标准纸色板的光谱比较，中.海以估计样品的细菌含量。试剂纸计数法快速准确，相比平板计数法，减少人为操作失误。

方法七：膜过滤计数：

用特制的滤膜过滤一些含菌样品，用AO(丫叮橙)染色，用紫外显微镜下查看细胞荧光颜色，死细胞会发出绿色荧光，活细胞会发出橙色荧光。

方法八：生理指标法：

微生物的成长伴随着酸碱度，发酵液中的含氮量/含糖量/产气量等生理指标的变化，有许多生产量相向的生理指标，是作为生长测定的相对值。

方法九：含氮量测定：

大部分细菌的含氮量为干重的12.5，酵母为7.5，霉菌为6.0。依据含氮量×6.25可确定粗蛋白含量。测定含氮量的方法很多，如用硫酸/过氯酸/碘酸/磷酸等消化法和杜马斯氮气法。 杜马斯法测 N₂ 气体法是将样品与 CuO 混合，在二氧化碳气流中加热产生氮气，收集在呼吸计中，用 KOH 吸收 CO2N₂ 的量进行测量。

方法十：碳含量测定：

将部分干重0.2~2.0毫克的生物材料混入1毫升水或无机缓冲液，用2毫升重铬酸钾的2%溶液100℃温度沸水加热三十分钟后冷却。用水稀释至5ml，在580纳米波长读取生长量可以通过吸光度值计算。需要试剂做空白对照，标准样品做标准曲线。

方法十一：测定氨基氮：

将发酵液离心，取上清液，加甲基红和盐酸为指示剂，加0.02N 氢氧化钠显色至颜色刚好褪去，加入基材18%的中性甲醛，反应一段时间，加入0.02N变色，氨基氮含量根据氢氧化钠用量换算。根据培养液中氨基氮的含量，可以间接反映微生物的生长状况。

方法十二：测定还原糖：

还原糖通常是指单糖、寡糖，能直接被微生物使用。还原糖的测定可以间接反映微生物的生长状况。经常应用大规模工业发酵生产中'海微生物生长的常规监测。测定还原糖方法是将发酵液离心。取上清液加斐林试剂，沸水煮三分钟，然后取出加少许盐酸酸化，接近终点时加入硫代硫酸钠，加入淀粉溶液，继续加硫代硫酸钠到终点，查表读取还原糖含量。

方法十三：测定其他生理物质：

P/DNA/RNA/ATP/NAM乙酰胞壁酸等指标，中 海以标记葡萄糖为底物的产酸/产气/CO2产量/耗氧量/粘度/产热等指标可用于生长的测定.也可以根据反应前后底物浓度的变化、最终产气量和微生物活性的变化来反映微生物的生长情况。

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