中海介绍不同菌种保藏储存方法的优缺点

一、菌种斜面低温保藏储存方法  

 1、将细菌接种在合适的固态斜面培养基上。细菌充分生长后，用油纸包裹棉塞，将其移至二至八摄氏度的冰箱中进行保存。  

 2、中海微生物霉菌，放线菌和带有孢子的细菌要保存二到四个月，然后移植一次。 酵母菌有两个月大，最好每个月移植一次细菌。  

此方法是实验室和工厂菌株房中常用的保存方法。它具有操作简单，使用方便，不需要专用设备的优点，中'海并且可以随时检查保存的菌株是否死亡，变异和污染。缺点是易于突变，因为培养基物理和化学性质不是严格恒定的。重复传代会改变微生物的新陈代谢，从而影响微生物的特性；有更多机会污染细菌。

二、菌种滤纸保藏储存方法

 1、将滤纸裁切成0.5*1.2厘米规格的小条，放入一两张0.6*8厘米的安瓿管中，塞满1.05kg / cm2的棉塞，在121.3°C下灭菌三十分钟。  

 2、培养需要保存在合适的倾斜培养基上以使其完全生长的菌株。   

 3、取1-2ml无菌脱脂牛奶并将其放入无菌陪替氏培养皿或试管中，然后将其与牛奶混合制成浓缩悬浮液。

 4、使用无菌镊子从安瓿管中取出滤纸条，并将其浸入细菌悬浮液中使其充满，然后将其放回安瓿管中，并在其上放一个棉塞。  

 5、将安瓿瓶管放入含有五氧化二磷作为吸水剂的干燥器中，并使用真空泵将其抽干。  

 6、将棉布放入试管中并用火焰密封，中海生物技术（zhzbio.com）

 7、需要使用菌株。恢复培养时，在火焰上加热安瓿的嘴，在被加热的部分上滴一滴冷水以打破玻璃杯，然后用镊子敲打玻璃杯。打开安瓿瓶后，将其取出。 

将滤纸放入中海液体培养基中，然后在培养箱中培养，细菌，酵母和丝状真菌可以通过这种方式保存。前两个可以保存大约两年，有些丝状真菌甚至可以保存十四至十七年。此方法比液氮和冷冻干燥方法简单，不需要特殊设备。

三、菌种液体石蜡保藏储存方法  

 1、将液体石蜡分配到锥形瓶中，用棉塞塞好并用牛皮纸包裹，然后用1.05kg / cm2，在121.3°C消毒加热30分钟，然后将其置于40°C的培养箱中以蒸发水蒸气，然后放置。 

 2、在最合适的斜面培养基中培养需要保存的细菌。  

 3、使用无菌吸管吸取无菌液体石蜡，然后将其注入细菌生长的斜坡。该量应在斜坡顶部上方1厘米处，以使细菌与空气隔离。  

 4、垂直放置试管，并将其存放在低温或室温下。在室温下储存的微生物寿命将比在冰箱中更长。  

此方法实用有效。霉菌，放线菌和孢子细菌可以保存两年以上而不会死亡，酵母可以保存1-2年，一般非孢子细菌也可以保存壹年左右，即使是脑膜炎球菌也很难按常规方法保存，在37℃下也可以在培养箱中保存三个月。 

此方法的优点是生产简单，无需专用设备且无需频繁移植。缺点是在存储过程中必须将其垂直放置，这会占用很大的空间并且不便于携带。从液体石蜡下面取下培养物并移植后，当接种环在火焰上燃烧时，中.海培养物很可能会与剩余的液体石蜡飞溅，因此应特别注意。 

四、菌种沙土保藏储存方法  

 1、取河砂，加入10稀盐酸，加热煮沸30分钟以除去有机物。  

 2、倒出酸性水，用自来水冲洗至中性。  

 3、干燥并用40目筛子过筛，以除去粗颗粒并放在一旁。  

 4、从非耕作层中取出不含腐殖质的瘦黄土或红色土壤，用自来水浸泡并清洗几次，直到呈中性。  

 5、干燥粉碎后通过100目筛子进行筛分，以除去粗糙的颗粒。  

 6、根据黄土的比例与砂子的比例为三分之三或根据需要以其他比例混合，甚至可以将所有沙子或所有土壤均匀混合，放入10×100毫米的小试管或安瓿瓶试管中，每支试管中约装1g，放在棉塞上，消毒并干燥。   

 7、取样进行无菌检查，每十根沙土管抽一次，将沙土倒入中海肉汤培养基，并在37°C孵育四十八小时。如果仍然存在细菌，则都需要重新消毒，然后可以使用无菌测试，它可以被使用直到被证明是无菌的。  

 8、成熟孢子层的选择通常是指孢子层的完全生长，而营养细胞对该方法无效。好的菌株用无菌水洗涤以制备孢子悬浮液。  

 9、向每个沙质土壤管中加入约0.5ml孢子悬浮液，通常只是为了润湿沙质土壤。 

 10、将其放在真空干燥器中，并使用真空泵排水。排水时间越短越好。确保在12小时内将其排干。  

 11、从10中取出一个，使用接种环取出一些沙粒，将其接种在倾斜的培养基上，然后培育成观察生长情况以及是否有细菌生长。如果细菌存在或菌落数量很少或根本不长，则表明生产的沙子和土壤管道存在问题，需要进一步抽样检查。  

 12、如果检查后没有问题，请用火焰密封喷嘴并将其存放在冰箱或室内干燥的地方。 每六个月检查一次活力和细菌状况。  

 13、需要使用细菌。恢复培养物时，取少许沙子，将其转移到中 海液体培养基中，然后放入培养箱中进行培养。  

此方法主要用于可产生孢子的微生物，例如霉菌和放线菌。因此，它是工业生产中使用最广泛的抗生素，效果良好。它可以保存大约两年，但是将其应用于植物细胞时无效。 

五、菌种冷冻干燥保藏储存方法  

 1、准备安瓿瓶试管。用于冷冻干燥细菌保存的安瓿管应由中性玻璃制成。形状可以是长颈和球形底部，也称为泪滴型安瓿管。该尺寸需要6-7.5mm的外径，105mm的长度和球形部分。直径为9-11mm，壁厚为0.6-1.2mm。 也可以使用不带球形部件的管状安瓿瓶管。放入1.05kg / cm2的棉塞，在121.3°C下灭菌30分钟，然后放置。 

 2、准备菌株并冷冻干燥保存的菌株菌株，保存期可以达到几年到十年以上。为了避免多年后出现错误，应特别注意所用菌株的纯度，即应没有杂菌。污染，然后在最佳温度下的中海培养基中进行培养，从而可以培养出良好的培养物。 

细菌和酵母菌的年龄要求超过对数生长期。如果使用对数生长期的细菌进行保存，则它们的存活率将会降低。通常，细菌需要24-48小时的培养；酵母需要培养3天；应当将形成孢子的微生物保存为孢子；将放线菌和丝状真菌培养7-10天。

 3、细菌悬液的制备和分配以细菌坡度为例，在倾斜管中加入约2ml脱脂牛奶制成浓缩细菌溶液，并向每个安瓿管中分配0.2ml。

 4、冻干机作为成套设备出售，价格昂贵。这里是可以达到相同目的的简单方法和设备。将等分的安瓿瓶管放入低温冰箱中并冷冻。没有冷冻剂，如干冰固态CO2醇液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。将安瓿瓶管插入制冷剂中，冷冻4-5分钟以冻结悬浮液。 

 5、真空干燥是在真空干燥过程中保持样品冷冻。有必要准备一个冷冻罐，在其中放置碎碎的冰块和盐，混合均匀，并可以冷却到-15°C。通常，如果真空在30分钟内可以达到93.3Pa0.7mmHg，则干燥的物料将不会融化，然后继续泵送空气。在几个小时内，肉眼可以看到干燥的材料已经变干，通常将真空泵抽至真空水平 26.7Pa0.2mmHg，保持压力6-8小时。  

 6、抽真空密封并干燥后，取出安瓿瓶管并将其连接到用于密封的玻璃管。使用L形五通管继续抽气，它将在大约十分钟内达到26.7Pa0.2mmHg。在真空状态下，安瓿的颈部被薄薄的喷枪火焰密封。 密封后，在室温下存放在冰箱或黑暗的地方。

六、菌种液氮冷冻保藏储存方法  

 1、准备用于保存液氮的安瓿瓶试管。安瓿瓶管必须能够承受温度的突然变化而不会破裂。需使用硼硅酸盐玻璃制造工艺生产的安瓿瓶，安瓿瓶的尺寸通常为75×10毫米，或者可以容纳1.2毫米液体的安瓿瓶。  

 2、在添加保护剂并进行灭菌以存储细菌时，酵母或霉菌孢子和其他易于分散的细胞，用1.05kg / cm2的棉塞塞住空的安瓿瓶管，并在121.3°C灭菌15分钟：如果用于保存霉菌菌丝，需要在安瓿瓶管中加入保护剂，例如10蒸馏甘油或10％二甲基亚砜蒸馏水。添加量限于以后可以添加的菌落圆，然后在1.05kg / cm2和121.3℃灭菌十五分钟。 

 3、用10％甘油蒸馏水溶液制成菌株，放入无菌安瓿瓶中。对于霉菌菌丝，使用无菌冲头从平板上切下菌落。将其放入装有保护剂的安瓿瓶中，然后用火焰密封。浸入水中以检查是否泄漏。 

 4、然后将密封的安瓿瓶试管以每分钟下降1°C的慢速冷冻至-30°C。 如果将细胞剧烈冷冻，则细胞内部会形成冰晶，从而降低存活率。 

 5、保存后，将安瓿瓶冷冻至-30°立即将C放入液氮冷冻机的小圆筒中，然后将小圆筒放入液氮保存器中。液氮存储中的气相温度为-150°C，液氮为-196°C。 

 6、需要恢复培养液时并保存菌株，取出安瓿瓶管，立即将其置于38-40°C的水浴中以快速融化，直到所有融化。然后打开安瓿瓶管，将内容物转移到合适的培养基中进行培养。  

此方法不仅适用于一般微生物的保存，还适用于某些难处理的中海微生物的保存。通过诸如支原体，衣原体，氢细菌等冷冻干燥方法进行保存，可以将难以形成孢子的霉菌，噬菌体和动物细胞保存很长时间，而不会改变其性质。缺点是需要特殊设备。  

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