关于质控菌种复苏和存放的常见十五问题解答

中海生物技术关于质控菌种复苏和存放常见的十五个问题，简单做以下解答，希望对大家有所帮助：

问题①该菌种为第三代，假如在零下八十℃存放后取出活化，应属哪一代？

解答：存放下来的是，第三代复活后，假如用盘子或者肉汤激活，相当于迁移了最初代，也就是第四代，假如还在瓷珠里，依然是原本的代数。假如保持在一个斜面上，这种斜面永远是第三代，假如迁移到另一个斜面上，便是第四代。传代培养/菌种活化/复苏的原理，无论以全部形式繁殖一次，都是一代代传下来的。然而，假如只有物理位置迁移而没有复制，那就不是通过。

问题②当菌种传代培养并存储在瓷珠中时，我们必须选取一个菌体吗？

解答：并不一定要挑单独一个菌体，但一定要挑基本特征一致的菌体，也就是从同一个菌体中提纯出来，保证它们的基本特征完全相同。原则是选取尽可能多，而不是少。

问题③菌种在零下七十度或是零下八十度低温存放有具体实施标准规范吗？

解答：有标准规范。《微生物菌种常规存放技术规范》是菌种保存的标准规范。你可以认真了解一下。全部的存放措施都有介绍，但瓷珠是一类相对比较新的存放措施，现阶段都还没收录。GB4789.28至2013推荐长期性冻藏环境温度不超过零下七十度。

问题④如何增加菌种的存放时长？

解答：很多科学试验证实，该菌种在低温/干燥/缺氧和缺乏营养的条件下存放效果最合适，越接近这一存放条件，该菌种的存放时长越长。比如甘油冷冻管，在零下八十摄氏度的存放时长比在零下二十摄氏度的存放时长要长。冻干菌粉可在零下二十摄氏度存放比二至八度环境时间长。

问题⑤怎样纯化菌种？

解答：纯化是从可疑菌体平板中挑选单独一个菌体，并在合适的非选择性平板(TSA、NA)上划线的操作过程。分离出来单独一个菌体。

问题⑥我们是不是需要重新传代培养，只存放最初代菌种？你觉得这是一个错误吗？

解答：通常状况下，是并不会问如此的问题的。最合适的存放措施应该是制备最初代菌种的甘油冻存管，放进超低温冰箱中长期存放。第二代应变做为工作储备应变，存放在斜面上。迁移后的第三代工作应变选用第二代工作储备应变。

问题⑦为什么要用第三代做为工作菌种？

解答：历经几次传代培养后，毒株的突变概率会大大增加，所以毒株的传代培养需要控制在五代以内，而最初代毒株通常相对来说不稳定，需要传到第三代才可以稳定毒株。所以在实际的工作中，中海生物通常选取第三代菌种做为工作菌种。

问题⑧质控品菌种传五代以上是不是要销毁？

解答：并不一定。历经五代以上的传代培养，只有品系变异的可能。然而，假如为第六代和第七代通行...是通过形态学/生化基本特征/DNA基本特征等来验证的，并且性状保持稳定，那么这些细菌在第五代之后仍然可以正常采用。

问题⑨菌种编码目的？

解答：以金黄色葡萄球菌CMCCB26003为例。CMCC是中国医学文化收藏中心的简称。其他常见的文化收藏包括ATCC美国标准文化收藏、CICC工业微生物文化收藏中心和FSCC食品安全文化收藏中心。B指细菌，F指真菌；2003年是CMCC的存放编码。

问题⑩金黄色葡萄球菌ATCC6538和ATCC25923都有啥区别？

解答：这两种皆来自（ATCC）美国标准培养物保藏中心的ATCC6538和ATCC25923菌种。不同的数字表明这两个菌种的初始分离出来源不同。然而不同的编号的生化基本特性是不是一致，需要深入分析研究。在常常的生物学检验试验中，发现金黄色葡萄球菌ATCC6538的溶血能力强于ATCC25923。

问题⑪用瓷珠存放管存放菌种。为什么要在加入菌液并摇匀后吸干菌液？

解答：瓷珠存放的原理是瓷珠是多孔的，细菌吸附在瓷珠上。假如去除液体，可以避免液体冷冻操作过程中产生的冰晶在反复冻融操作过程中破坏细菌，最终得以保护细菌。假如菌液不吸干，瓷珠的存放就达到不了反复冻融的效果。

问题⑫你们TSA斜面储藏于多少度？你能把它放在冷库里吗？

解答：细菌的TSA斜面通常存放在二至八摄氏度，即冷冻冷藏。而弧菌/铜绿假单胞菌/嗜水气单胞菌等对低温敏感的菌种，在二十至二十五摄氏度的室内温度下短时间存放，用甘油管或瓷珠长期性冷冻。

问题⑬液体培养基可以用以回收冻干菌种吗？

解答：可以，但假如选用液体复苏，只能够观察到混浊的中海培养基，不可以确定是不是有污染。推荐选用平板培养基复苏冻干菌种，有利于促进简单通过肉眼观察菌体形态来鉴别回收菌种是不是被污染，初步鉴定菌种的纯度。

问题⑭显色培养基可以用于冻干菌种的回收吗？

解答：不建议使用显色培养基复活冻干菌种。冻干菌种是冻干的。在这个操作过程中会受到一定程度的破坏，复苏需要一个最合适的生长环境，所以不可以选取复苏培养基做为带有抑菌成份且不利于菌种复苏的选择性培养基。显色培养基应属选择性培养基。

问题⑮产气荚膜梭菌冷冻时需要保持厌氧状态吗？

解答：并不需要。产气荚膜梭状芽孢杆菌应属厌氧菌，但对厌氧程度要求不太严格要求，可以根据通常菌种冷冻法做好冷冻。如果是严格要求目的上的厌氧菌，需要特殊的冷冻措施。

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