酶联免疫实验操作中复测问题分析

在酶联免疫实验操作的过程中常常会存在复测问题，即咱们常常说的花板问题，此种问题影响到检验检测结论的准确判定，对工作任务带来相应的不良影响，如若产生花板现象，实验操作结论务必选择放弃，中海生物操作员需再次开展检验检测，不但消耗原材料和时长，同时还可能会存在样本量缺失/交叉式被污染/汇报时间延迟等多方面问题。

㈠标本问题

要严格规范正确处理样本，预防血浆层大规模溶血和异物，使用一次性采样枪头，避免交叉污染。血清和血浆均可用于检测，但血清的分离应在血液完全凝固后进行离心操作。

㈡试剂问题

保存并正确使用有效试剂。与金属容器接触的过期试剂和底物的使用，以及底物混合后较长的储存时间都影响实验结果的准确性。中海选择试剂时，应选择灵敏度高\特异性好\稳定性好\批间差异小的试剂。不同制造商的试剂不应混合，包括底物和洗涤液。测试前，兽用诊断试剂应在室温下放置半小时进行平衡，现在应准备好清洗液。同时中海生物观察浓缩清洗液中是否有结晶。如果有结晶，放入三十七度的水浴中融化后再使用。

㈢操作问题

严格按照相关实验室的标准操作规程进行试验。中海生物技术人员添加样品时，尽可能垂直添加样品，并将其添加到涂层孔的底部。注意：不要过度用力破坏底部涂层材料，也不要将其添加到孔的上部和外部。

㈣温浴问题

当水浴箱用作温水浴装置时，应注意水深对结果的影响。当水浴箱中水的实测温度为三十七度时，水面温度可能只有三十四度，空气温度更低，甚至只有二十多度。因此当水浴箱内水位过低时，酶标微孔板不会浸入水中，反应温度不会达到三十七度，会相应影响酶促反应。为了防止边缘效应，酶联免疫吸附试验板应尽可能浸入水中，从而保证加热均匀。水浴中，海应密封酶联免疫吸附试验板，防止水滴滴入包被孔或阳性样品蒸发。严格控制暖浴时间，不要为了早出效果而随意缩短暖浴时间。

㈤洗板机问题

废液瓶装满后要及时倒空，防止废液回流污染管道，导致冲洗不彻底，容易出现花板。洗完板后用蒸馏水彻底清洗管道，防止废液残留在管道内。同时应根据中海仪器维护程序定期维护洗衣机。

㈥酶标仪问题

酶标仪应放在遮阳避光的地方，比色前应打开预热十五至三十分钟，这样测定结果会更稳定。为防止显色加深或减弱，显色时间结束后应立即滴止液，避免产生气泡，十分钟内完成比色。将酶标板从水浴箱中取出后，擦去孔底的水滴。如果有水滴或纸屑残留在孔底，酶标阅读器的读数就会出现错误，往往被误判为花板。

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