琼脂培养基制备使用介绍及注意要点

琼脂(Agar)是一类从植物中提取的多糖，主要是源自于海藻植物。在微生物培养基中，琼脂通常只用作凝固剂。流体培养基中琼脂的用量通常为0.5~2g/L，使培养基拥有相应的粘性，避免液体对流。它经常使用于厌氧培养。

半固体培养基琼脂用量通常为3.5~4g/L，经常使用于菌种保藏、动态试验等。植物组织培养基中琼脂的用量通常为5~10g/L，固体培养基中琼脂的用量通常为5~10g/L。通常琼脂粉为白色、浅黄色或浅灰色粉末，不溶解于冷水。大多数琼脂的熔点在90℃左右，冷却后大多数琼脂的冰点在40℃左右。反复加热冷却可以使琼脂多次由液态变为固态，但琼脂的凝胶强度会愈来愈低。

①依据琼脂培养基的产品标签，称取适量培养基干粉，溶解于纯净水中，加热煮沸至琼脂完全溶解，分装于试管或锥形瓶中；

②在规定的条件下对包装好的培养基进行灭菌。加热灭菌后的培养基可反复煮沸4~6次，一直到培养基完全溶解，然后倒入平板中待用；

③灭菌后，待培养基冷却至50℃左右时，可放至47~50℃的水浴中保温。水浴温度可依据琼脂培养基实际凝固温度适当提高，存放时间通常不超过四个钟头；

④使用前，加入相应的添加剂成分，摇匀，倒入平板中，凝固后备用；或制成斜面，投入使用等。

①溶解干粉时，提议水温在40℃以下，不超过60℃。琼脂遇到热水，表面容易吸水变硬，不利于分散和溶解。所以干粉溶解时，宜用冷水并不断搅拌，一直到分散均匀无结块，后再加热。

②灭菌前，须要将琼脂加热煮沸，使其完全溶解分散均匀后，方能进行试管或锥形瓶分装，不然分装后琼脂可能分布不均、凝结；

③灭菌前加热煮沸溶解还有助于加快高压灭菌过程中的热量渗透，提高灭菌效果，降低灭菌失败的概率。

④凝固的培养基不能重新高温高压灭菌。倘若培养基中的成分稳定，可以在沸水浴中重新溶解以供一次使用。

⑤须要添加抗生素或其他不稳定成分的培养基应在使用前添加，当培养基冷却至50~55℃时添加。过早或过烫加入这些成分，容易导致不稳定成分分解，降低培养基的使用效果；

⑥固化后的培养基不能反复加热融化使用。反复加热容易分解培养基中的营养物质，琼脂的凝胶强度下降。通常允许成分稳定的培养基溶解一次使用。

⑦固化的培养基不宜储存在冷冻条件下。培养基冷冻会破坏琼脂的内部结构，造成琼脂变性，水分流失或凝结不良。

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