微生物菌株常用十种贮存方法汇总简述

第一种方法：常规微生物菌株贮存

此方法操作非常简单，直接贮藏在普通冰箱中，并且可以在微生物学实验室中使用。此法缺点是微生物菌株保留时间短、传代频繁，并且菌株易于突变。  

第二种方法：半固体穿刺贮存

通过穿刺接种法把中海细菌培养物接种到半固体培养基中，在二十四小时培养后，加一层无菌液体石蜡，厚度约壹厘米，并保存在冰箱中。肠杆菌和葡萄球菌等，通常可以保存三个月至半年时间。当需要继代培养和移植时，倾斜半固体应变管以使液体石蜡流到一侧，然后将细菌转移到中海培养基zhzbio.com中。将少量液体石蜡放在高浓度医用消毒酒精中的接种环上，然后进行燃烧消毒，以避免直接在酒精灯上燃烧，液体石蜡会溅到周围并造成污染。如果保存副溶血弧菌，则可以添加氯化钠制成3.5高盐半固体，在室温下它可以保存壹个月。  

第三种方法：沙管贮存 

适用于产生孢子的细菌，将筛分的中性细沙干燥，放入约一厘米高的小试管中，用棉塞塞好，然后消毒并干燥以后使用。用无菌生理盐水洗涤掉中.海生物培养基上的细菌培养物以使细菌悬浮。然后吸取约半毫升的这种细菌悬浮液，并将其倒入砂管中，以使沙子完全润湿。塞上棉塞，放入干燥器中沥干水分。然后将其置于氯化钙吸收干燥剂瓶并保留在冰箱中以备后用。使用时可以在适合的培养基上接种沙子接种环。    

第四种方法：斜面贮存 

普通琼脂斜面贮存方法：普通琼脂斜面可接种葡萄球菌，肠杆菌和其他不需要高营养的细菌，底部应加入少量无糖肉酱防止干燥，但应将Proteus OX和伤寒bar O菌株接种在干燥的琼脂斜坡上，以防止突变。将其用橡胶塞塞紧，在经过孵育后，将其存储在冰箱中，该冰箱通常可以存储贮存菌株三个月或半年。 

血液琼脂斜面贮存方法：链球菌和血琼脂斜面上应接种肺炎球菌和其他营养要求高的细菌。经过培养和生长，请存放在冰箱中。链球菌必须每15-30天移植壹次，肺炎球菌必须每四天移植一次。 在倾斜的浸入液中加入无菌液体石蜡，然后超过约壹厘米，存放在冰箱中。此方法用于存储含有Vi抗原的沙门氏菌，而其他含有表面抗原的细菌则可以存储90-180天。

吕氏血清斜面：白喉棒状杆菌可以存储在这种中 海培养基上，其成分为1份pH7.4的葡萄糖肉汤，三份无菌牛血清或兔血清。白喉棒状杆菌在这种培养基上快速生长旺盛，并且细菌的形态是典型的。如果将5~10%中性甘油添加到中'海培养基中，则培养的白喉棒状杆菌异色颗粒将更加明显，并且它们将在一天后老化并变成多态性，几乎没有差异。染色后的颗粒，细菌体大三四倍，放在冰箱中可以保存14-30天。

第五种方法：冷冻贮存 

中海实验室必须配备低浓度的温度低于零下二十度的冰箱，中海生物技术人员提示：冰箱的温度越低，保存时间就越长。  

第六种方法：滤纸片超低温贮存菌种 

切开新华滤纸放入3毫米x 3毫米的容器中，对其进行高压灭菌，然后将其放入装有盖的半毫升无菌塑料离心管中，以供使用。分离并纯化要保留在血板上的细菌后，使用无菌镊子夹住滤纸，将大量细菌刮在板上，然后将其放入塑料离心管中，然后可以将一根离心管放进去。几十张带有细菌的滤纸，然后盖上盖子，用胶带将盖子密封好，并注明患者的姓名，细菌名称和保存日期。将塑料管放入零下七十度冰箱中。使用时，从塑料离心管中取出一个细菌，将其放入富集肉汤中，孵育十八至二十四小时，然后将细菌悬浮液转移至血平板中。此方法适合于保存不需要高营养的细菌，但不适合保存更为严格的微生物菌种。  

第七种方法：商品化的微生物菌株贮存管 

每个保藏管包含二十至二十五个珠子和缓冲液。使用时，将菌落放入缓冲液中，混合，吸取缓冲液，然后将其在零下十度冰箱中保存十年，然后可以在零下二十度冰箱中保存一至三年。恢复时只需要将珠子放入肉汤中或在板上滚动即可。商业菌株保存管操作简单，但价格昂贵。中海生物期望随着经济的发展及实验室条件的不断发展和完善，将有更好的生产设备使用。  

第八种方法：菌株的细菌识别卡贮存 

此方法适用于使用VITEK自动微生物识别仪的实验室。方法是直接在识别卡上标记识别卡并将其存储在零下二十度冰箱中。进行复苏时，将识别卡直接从零下二十上升至零上三十五度，并等待直至小孔液体完全融化。使用注射器按照无菌步骤将阳性生长孔中的液体吸出，将其放在合适的板上，然后将其放在培养箱中放置一至两天。该方法的生化卡中的细菌被反复冷冻和融化五次并分离产生的细菌是相同的。金黄色葡萄球菌，肠杆菌和念珠菌的生存时间不少于两年半;肠球菌，黄杆菌和不动杆菌的生存时间不少于一年半，链球菌和假细菌的生存时间，莫纳斯的生存时间不少于十个月。

第九种方法：湿牛奶冷冻贮存

原料保护性牛奶的制备：将鲜牛奶反复通过吸收性棉过滤三次，用十磅的高压釜灭菌十分钟，并保存在冰箱中以备后用。关于菌种管的处理：首先在清洁溶液中浸泡一天，然后用清水冲洗，然后在蒸馏水中浸泡过夜以达到中性，然后用棉塞塞住喷嘴，并高压灭菌十五磅压力，持续半小时以供使用。方法将各种细菌种植在生长良好的平板培养基上，纯化后，将它们在培养箱中孵育十八小时，然后用制备的保护性牛奶清洗苔藓，然后用无菌毛细管滴管吸取细菌悬液。将液体倒入菌株的球茎中，每个球茎中大约一半的细菌，然后火焰密封，并保存在零下二十度冰箱中。抵抗力强的细菌可以保存至少36个月，抵抗力弱的细菌可以保存不少于24个月。

第十种方法：冷冻真空干燥贮存 

这种方法是最好的方法目前用于保存菌株。其优势特点是应用广泛性。除了一些不产生孢子而仅产生菌丝体的丝状真菌外，不适合该方法贮存，其他主要类型的微生物如细菌/放线菌/酵母/丝状真菌和病毒也可以通过该方法贮存。有着保存期长，成活率高的特点。实际应用中，在真空冷冻干燥的安培管中保存的真菌的生存期长达四十年，通常微生物菌种可以保存不少于十年。在保存期间，微生物菌种贮存可以避免被其他细菌污染；它易于携带和运输，并且易于实现商业化生产。其缺点是需要某些设备，冷冻真空干燥器以及繁琐的操作。传统上使用过滤管将玻璃过滤管改为带盖的半毫升塑料离心管。将塑料离心管放入耐高压塑料离心管盒中，用双层报纸包好，用高压蒸汽灭菌十五磅十五分钟，然后放入烤箱干燥八十分钟。在净化工作台中，将用脱脂奶洗过的浓稠细菌悬浮液添加到带有长毛细管玻璃滴管的塑料离心管底部，每次约五分之一毫升，切记不要用离心机污染离心管口。牛奶用添加的细菌液体离心，将试管箱在零下二十度的冰箱中预冷冻。预冷冻后，将离心管箱放入冷冻干燥机的干燥箱中进行冷冻干燥。冷冻干燥后，在不抽真空的情况下将离心管盖压入纯化工作台。标签和密封用膜密封离心管的嘴并存放在零下二十度冰箱中。

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