无血清支原体(辅助液|液体|固体)培养基使用说明书附培养基检验

无血清支原体(辅助液|液体|固体)培养基使用说明书

【产品名称】

中文名称：无血清支原体培养基（https://www.zhzbio.com/product/jypyj-wxqzyt.html）

英文名称：Sera Free Mycoplasma Medium

汉语拼音：Wuxueqing Zhiyuanti Peiyangji

【性状】 液体培养基为澄清，无杂质，呈玫瑰红色液体；固体培养基为淡黄色固体，加热融化后无絮状物或沉淀；固体培养基辅助液恢复至室温后为橙色液体。

【作用与用途】 用于血清中支原体的检验。

【用法与判定】

1. 液体培养基 先放在室温半小时，然后置于常温水中轻轻摇动融化，待全部融化后分装后使用。分装量为：小瓶 20ml/瓶，小管 1.8ml/支。

2. 固体培养基 先将固体培养基和辅助液放在室温半小时。将固体培养基塑料盖拧松一点，微波炉或水浴融化。微波炉融化时使用中火，每次1分钟，待全部融化后使用。辅助液置于常温水中轻轻摇动融化，待全部融化后使用。当固体培养基温度降到 50℃左右时，,辅助液 37℃预热后缓慢贴壁加入，混合均匀后按平皿规格加入适量培养基（例如直径 60mm 的平皿加入固体培养基 9ml）制成固体平板。

3. 检验 取2ml 样品加入到小瓶中，0.2ml 样品加入到小管中，从小瓶中取液体，分别移植到2支小管液体培养基（0.2ml/支）、2 付固体培养基（0.1~0.2ml/付），将小瓶与小管放37℃培养，固体培养基放置 37℃、5%CO2 培养箱中培养。接种后第5日、第10日、第15日从小瓶中取培养物移植2支小管液体培养基（0.2ml/支）和2付固体平板（0.1~0.2ml/付）。每日观察培养物颜色有无变黄或变紫红的现象，若无变化，在最后 1 次移植培养 14 日后停止观察。在观察期内，如小瓶或任何1支小管培养物颜色出现明显变化（pH 变化达±0.5）时，应立即移植于2支小管液体培养基和2付固体平板进行培养，观察液体培养基是否出现恒定的pH变化以及固体培养基有无支原体菌落生长。每次检验时，均应同时设立阴、阳性对照。阳性对照为接种1~10CFU/0.2ml 质控菌液（猪鼻支原体BTS-7株）的小管液体培养基，和接种1~50CFU/0.2ml 质控菌液的固体平板培养基；阴性对照为接种灭菌生理盐水的小管液体培养基和固体平板培养基，同上法培养和观察。

4. 结果判定

4.1 检测结果有效性 当阳性对照液体培养基出现颜色变黄，固体平板上出现支原体菌落；阴性对照液体培养基不变色，固体平板上无支原体菌落时，检验有效，并作如下判定。

4.2 判定 若接种样品的小瓶或小管培养基出现颜色变黄，且固体平板上可见支原体菌落，则判该样品有支原体污染。

【注意事项】

1. 中海无血清支原体培养基自低温环境取出，恢复到室温后使用。液体培养基和辅助液常温融化；固体培养基可微波炉或水浴加热融化。

2. 制备固体平板时，固体培养基冷却至50℃左右，,辅助液37℃预热后缓慢贴壁加入，轻摇混匀，避免出现气泡。

3. 进行培养基灵敏度检验时的器皿，必须达到细胞培养的要求。

4. 如液体培养基出现浑浊或颜色变化，固体培养基平板表面干裂，应停止使用。

【规格】 无血清支原体液体培养基90ml/瓶；无血清支原体固体培养基60ml/瓶；无血清支原体固体培养基辅助液13ml/瓶。

【贮藏与有效期】 无血清支原体液体培养基-20℃以下保存，有效期为12个月；无血清支原体固体培养基 2~8℃保存，有效期为12个月；无血清支原体固体培养基辅助液-20℃以下保存，有效期为12个月。

【生产企业】  北京中海生物科技有限公司

              中海生物技术（枣庄）有限公司  

              网址：www.zhzbio.com  

仅供兽医诊断使用

附：培养基检验

1. 质控菌株 检验用质控菌株为猪鼻支原体BTS-7株。将冻干种子恢复原量以 10%的量接种无血清支原体液体培养基（使用前加入10%血清），经 35~37℃培养至变色，作为第1代；将第1代培养基物按 10%接种量接种无血清支原体液体培养基（使用前加入 10%血清），

35~37℃培养12~72h，取活菌滴度≥108CCU/ml 培养物作为工作种子。在使用过程中冻干种子传代次数不超过5代，工作种子在-20℃以下保存有效期为20日。

2. 检验方法

2.1 灵敏度试验

（1）培养 取工作种子液用待检液体培养基进行10倍系列稀释至10-10，另设1支未接种液体培养基作为对照，置35~37℃培养5~7日；取10-6稀释度菌液0.2ml 接种于固体培养基平板1个，另设1个未接种固体培养基平板作为对照，置37℃、5%CO2培养箱中培养 5~7日。同时各做2组重复。

（2）结果判定 以培养基呈现生长变色的最高稀释度作为其灵敏度。如果2组培养基灵敏度均≥10-8，对照不变色；固体培养基均有支原体菌落生长，对照无支原体菌落生长，判培养基合格。若仅1组液体培养基灵敏度≥10-8，或1组固体培养基有支原体菌落生长，取2倍待检品重检。重检后，如液体培养基灵敏度均≥10-8，固体培养基均有支原体菌落生长，判为合格。否则，判为不合格。

改良Frey氏培养基使用说明书               支原体培养基使用说明书

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