无血清支原体培养基培养基检验方法

无血清支原体培养基培养基检验

1. 质控菌株 检验用质控菌株为猪鼻支原体 BTS-7 株。将冻干种子恢复原量以 10%的

量接种无血清支原体液体培养基（使用前加入 10%血清），经 35~37℃培养至变色，作为第

1 代；将第 1 代培养基物按 10%接种量接种无血清支原体液体培养基（使用前加入 10%血清），

35~37℃培养 12~72h，取活菌滴度≥108CCU/ml 培养物作为工作种子。在使用过程中冻干种

子传代次数不超过 5 代，工作种子在-20℃以下保存有效期为 20 日。

2. 检验方法

2.1 灵敏度试验

（1）培养 取工作种子液用待检液体培养基进行 10 倍系列稀释至 10-10，另设 1 支未接

种液体培养基作为对照，置 35~37℃培养 5~7 日；取 10-6 稀释度菌液 0.2ml 接种于固体培养

基平板 1 个，另设 1 个未接种固体培养基平板作为对照，置 37℃、5%CO2培养箱中培养 5~7

日。同时各做 2 组重复。

（2）结果判定 以培养基呈现生长变色的最高稀释度作为其灵敏度。如果 2 组培养基灵

敏度均≥10-8，对照不变色；固体培养基均有支原体菌落生长，对照无支原体菌落生长，判

培养基合格。若仅 1 组液体培养基灵敏度≥10-8，或 1 组固体培养基有支原体菌落生长，取

2 倍待检品重检。重检后，如液体培养基灵敏度均≥10-8，固体培养基均有支原体菌落生长，

判为合格。否则，判为不合格。

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