胰酪大豆胨琼脂培养基验收的注意事项

1、质控菌株的确认

  《中国药典》四部1105和1108中采用金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉这五株标准菌株对TSA进行适用性检查；《中国药典》四部1106和1108中需用TSA对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌和乙型副伤寒沙门菌进行菌液制备；《中国药典》四部1121中采用金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、白色念珠菌和黑曲霉这五株标准菌株对TSA进行适用性检查；因此验收TSA的质控菌株可根据实验室的具体用途从相关通则中进行选择。

  值得注意的是，除了使用标准菌株验收TSA，还应增加生产环境及产品中常见的污染菌株。虽然标准菌株涵盖了自然环境中最为常见的微生物种类，包括革兰氏阳性球菌和杆菌、革兰氏阴性杆菌、产芽孢的杆菌以及真菌，但不能完全代表样品中部分较为特殊的菌群。曾有学者考察过8个厂家TSA（对药典要求的标准菌株均具有良好的促生长能力）对人参土芽孢杆菌的促生长能力(回收率)[1]，结果培养5天后，仍有3个厂家TSA不能达到50%的回收率。即人参土芽孢杆菌对TSA的质量具有更好的筛选区分能力，该文章也建议将人参土芽孢杆菌作为质控菌株进行TSA的适用性试验，避免由于培养基促生长能力不足而导致误判的风险。

2、pH值监控

  pH值是培养基的常规监控项目，TSA的标准为灭菌后在25℃的pH值为7.3±0.2。

3、培养基性状

培养基性状也是验收TSA的关键项，直接影响能否顺利完成试验以及结果的准确性。

对于商品化的脱水培养基，首先要确认干粉粉末是否均一，颜色是否发生变化，若为颗粒型培养基，需确认其粒度及溶解性；其次要确认灭菌后培养基外观颜色是否正常、是否澄清无异物；制备好平板后，软硬程度要适合涂布、划线、倒置培养等基础微生物操作；若采用倾注法，需确认融化的TSA培养基在45~50℃的环境中放置8小时无凝固现象。

对于商品化的预制培养基，最重要的是培养基的无菌性检查；其次要确认外包装完整无损，无过多水汽，平板颜色正常、无异物、无气泡，倒置培养无掉板现象等。

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