实验室支原体污染检查验证六种鉴别办法简述

第一种：分离培养法

支原体的致病性检测为主要通过从受污染的细胞组织中分离培养支原体来确定。分离培养法是支原体污染检测最可靠最准确的方法。然而支原体对环境的影响非常敏感，极易被灭活，分离培养操作相对麻烦并且检测周期长。通常只能对支原体污染检查进行定性观察。分离和培养方法常用于辅助支原体常规检测中的其他检测方法。

第二种：DNA荧光染色法

DNA荧光染色法相比分离培养法减少了检查验证时长，常用于细胞培养中污染支原体的检测。DNA荧光染色法是基于荧光染料可以与支原体DNA中的AT碱基富集区结合的原理。中海检查被支原体污染的细胞染色后，在细胞核外和细胞周围可以看到许多大小均匀的组织。

第三种：ELISA酶联免疫吸附试验

ELISA一般用于检测支原体污染检验，具有良好的特异性和灵敏度高，可统一完成大量样品的检测，拥有快速定量定性简单检测等诸多特点。

第四种：PCR技术

PCR有着快速灵敏特异简便的基因诊断技术，PCR检测技术已被用于科学研究和疾病诊断等支原体污染鉴别，其可统一检测大批量样本，其有周期短/灵敏度高/特异性好/操作简单等优点。中海生物依据支原体基因组中的保守序列设计特异性引物，对待测样品的核酸进行扩增，通过分析扩增产物的大小进行诊断。

第五种：电子显微镜

通常细胞培养需两至三天时间，在细胞接近结合前，将细胞胰酶消化制成细胞悬液，然后用电子显微镜在观察前采用固定嵌入和分段等流程。

第六种：定时周期性检查 

通常情况支原体感染会使培养的细胞逐渐灭亡，所以对培养的细胞进行定期支原体检测非常重要。支原体污染检查验证重点是对实验室细胞培养进行常规支原体污染检测的规范化，做到每30~90天做一次支原体检查验证。

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